细胞迁移(Cell Migration)实验
除了通过在血液中移动将氧气输送到全身各个角落的红血球以外,组成生物体的数量庞大的细胞几乎都不会从特定位置移动,仅在原地发挥功能。另外还有像免疫细胞一样,不仅在血液中移动,还在体内组织旺盛地活动的细胞。下面说明此类细胞移动及其评价实验。
细胞迁移(Cell Migration)及其评价方法
细胞迁移(Cell Migration)是指,将细胞从原有位置移到其他位置,也称为细胞爬行。例如,在治愈表皮上形成的损伤的“创伤愈合(wound healing)”过程中,就可观察到细胞迁移。皮肤发生损伤后,首先凝血因子将被激活,在创伤部位形成血栓以起到止血的效果(止血期)。然后,由于免疫反应,中性粒细胞或巨噬细胞、淋巴细胞等炎症细胞迁移到伤部,去除坏死组织等(炎症期)。之后由巨噬细胞释放的物质使周围的纤维芽细胞迁移至伤部,产生用于修复的胶原蛋白,引起血管新生并形成肉芽组织(增生期)。最后迁移表皮组织,使伤口收缩并愈合(重塑期)。经过这些过程伤口获得治愈。
另外,将细胞迁移到细胞外基质(Extracellular Matrix:ECM)以外,并固定在该位置的现象称为“细胞侵袭(cell invasion)”。例如,因感染细菌或病毒而引起炎症时,中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等炎症细胞将由于生物防御反应而迁移到炎症部位,并侵袭炎症组织,即引起“炎症细胞侵袭”。此外,还发生癌细胞等肿瘤细胞侵袭周围组织或脏器并扩散的“肿瘤细胞侵袭/癌细胞侵袭”等。
细胞迁移在创伤愈合或细胞分化、胚胎发育等中发挥重要作用。同时,若细胞迁移时发生一些错误,就会导致肿瘤形成或转移、癌症转移等严重后果,因此与体内的各种现象具有紧密联系。
细胞迁移实验的种类
通过细胞迁移实验,可对研究对象细胞的迁移能力等特性或侵袭机制进行观察,或对促进细胞迁移或侵袭的因子及条件进行研究。细胞迁移实验应用于医药品或化妆品的细胞迁移促进作用验证或肿瘤转移、癌症转移研究,及对其进行控制的医药品或治疗法的研发等。下面介绍对细胞迁移或侵袭进行测量及评价的典型细胞迁移实验。
趋化性实验(Chemotaxis Assay)
根据环境中的特定化学物质的浓度梯度来迁移的趋化性(chemotaxis)的细胞包括,白细胞(中性粒细胞)、淋巴细胞、巨噬细胞等免疫细胞或纤维芽细胞、内皮细胞、上皮细胞、肿瘤细胞等。将细胞因子(cytokine)中一种的化学因子(chemokine)等化学引诱物作为趋化因子引起迁移。此时,如果向浓度梯度变高的方向移动,则称为“正趋化性”。而向浓度梯度变低的方向移动时称为“负趋化性”,显示负趋化性的物质称为化学排斥因子。在评价趋化性的细胞迁移实验中,可通过设在微孔内的插入薄膜并附着在存在趋化因子的底面的细胞为迁移细胞,而不通过薄膜的细胞可评价为非迁移细胞。
趋触性实验(Haptotaxis Assay)
在评价趋触性(haptotaxis)的细胞迁移实验中,作为纤维芽细胞、内皮细胞、上皮细胞等细胞迁移因子的化学引诱物,在孔内配置用胶原蛋白或纤连蛋白涂抹底面(内侧)的插入膜,根据细胞是否被引导并迁移至孔内,可判定具有趋触性的迁移细胞与非迁移细胞。另外,依据细胞接合的部位或与细胞外基质(ECM)结合的化学引诱物浓度梯度,测量不同细胞的迁移性。
创伤愈合实验(Wound Healing Assay)
在多孔培养板上再现创伤愈合条件的in vitro实验。作为其典型的试验方法的划痕实验,通过让细胞迁移至有意划出的模拟伤痕,进而对免疫细胞等进行测定和评价。通过测量创伤愈合中的组织基质构建及相关细胞的差异、不同培养条件下的细胞增殖或侵袭等划痕修复中的细胞侵袭,可应用于医药品等的研发及评价。
细胞侵袭实验(Cell Invasion Assay)
癌细胞可以冲破基底膜脱离产生组织,并侵袭周围组织。然后,癌细胞迁移到血管内,随着血液输送到体内的其他部位。之后在运抵的其他部位癌细胞进行增值,从而发生癌症转移。癌细胞在侵袭时,在细胞接合、基底膜、细胞外基质(ECM)中,利用随之发生的蛋白质的水解或细胞迁移,通过在插入膜涂抹胶原蛋白或层粘连蛋白、基底膜基质溶液,找出并测量细胞瘤。使用24well或96well多孔培养板在in vitro中促进细胞侵袭的环境下,测量侵袭细胞,从而应用于细胞侵袭评价或阻碍侵袭的物质的研究。为找出并测量细胞瘤,在细胞培养后进行染色。
细胞迁移能力评价的问题与解决方法
在各种细胞迁移实验中,使用符合目的的实验组件,测量细胞迁移或侵袭并评价迁移能力等。为确保同一环境条件下的N数,使用24well或96well多孔培养板,利用计数器来分析、测量众多标本需要花费大量时间与劳力。另外,不仅难以同时分析、测量多个孔内的活细胞状态或变化,而且还存在因人为错误导致测量误差或评价偏差的问题。
正确分析、评价细胞迁移的方法
基恩士的一体化荧光显微成像系统BZ-X800,可对多孔培养板中需要观察的孔进行延时图像的自动连续拍摄或视频拍摄,凭借自动对焦或全焦功能,可对多个孔中的每个孔分别拍摄清晰的图像及视频。
拍摄视频后,使用分析应用程序,可对大量的孔分别进行视频分析(动态分析)。只需点击测量目标并指定目标范围的简单操作,即可在自动跟踪目标以记录位置坐标变化的同时,分析趋化性及趋触性等细胞迁移能力。此外,延时拍摄或视频拍摄过程中也可每隔一段时间检测细胞迁移或侵袭的进展情况。
此外,如果使用混合细胞计数,可准确测量微孔内的信号部分的面积。在使用宏细胞计数的自动测量中,只要从多个图像中测量1张,即可在剩余的大量图像上适用同一条件,可快速实施定量测量。
通过BZ-X800的丰富功能,得以在超短时间内高效完成多孔培养板中的细胞迁移或细胞侵袭分析等作业,同时通过高精度的定量测量,可以获得可靠性高的数据。
如果引进一体化荧光显微成像系统BZ-X800
- 可对多孔培养板的各个孔进行延时图像的自动连续拍摄或视频拍摄。
- 通过自动对焦、全焦功能,可获取多个孔分别对焦的清晰图像及视频。
- 在延时拍摄或视频拍摄中,可每隔一段时间检测细胞迁移和侵袭的进展情况。
- 如果使用混合细胞计数,可只正确测量各个孔内的信号部分的面积率。
- 可将混合细胞计数中执行的宏细胞计数测量条件适用于其他孔的图像,以同一条件批量测量数量庞大的孔。
- 在完善的测量条件下进行定量测量,可排除随意性而获得高可靠性分析结果。